HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定

• 作者: 刘慎沛 徐向上 李兆明 李小兰 王桂华 罗学来 肖徽 胡俊波 陶德定 魏欣 龚建平
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组腺病毒 HAX1 载体构建 增殖
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-22
• 页数: 7页
• 分类号: R373
• 字数: 5134字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.01.004

摘要

目的 构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体.方法 采用DNA重组技术,将目的 基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,并转化于大肠埃希菌DH5α;筛选出重组质粒pAdTrack-CMV- HAX1,并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体;用lipofectamine将其转染HEK293细胞,包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pAd-HAX1-EGFP,酶切和序列测定鉴定;用制备好的Ad-HAX1-EGFP感染HEK293细胞,流式细胞术检测其感染效率,RT-PCR、Western 印迹鉴定外源基因HAX1的表达.BrdU检测感染了Ad-HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况.结果 pAdTrack-CMV-HAX1重组质粒构建成功.pAdTrack-CMV-HAX1 质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符.构建好的Ad-HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞;外源基因能在239细胞中有效表达.HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高.结论 成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体,HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖.