重组腺病毒载体Ad5-Olig1-eGFP的构建与鉴定

• 作者: 张拥波 王得新 王苏平 赵红
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脑血管障碍 腺病毒载体 Olig1 基因重组
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 526-529
• 分类号: R346
• 字数: 3855字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2012.04.003

摘要

目的:转录因子Olig1调控了少突胶质前体细胞的分化和成熟,并参与了脱髓鞘损伤后的修复,是治疗脱髓鞘疾病的候选基因,在缺血性脑血管病的治疗中具有极大的应用价值.本实验旨在构建携带Olig1基因的重组腺病毒载体.方法:pDC315-Olig1为模板,聚合酶链反应扩增酶切Olig1片段,连接到带有eGFP标记基因的载体质粒pDC315-eGFP上,构建穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP,经PCR,酶切及测序鉴定后,利用AdMax包装系统,通过脂质体2000的介导与骨架质粒pBHGIox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组后产生复制缺陷型重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,应用PCR对毒种进行鉴定,传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒.以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.结果:经聚合酶链反应,酶切鉴定和测序分析,得到大小700 bp(Olig1)目的片段,证实正确构建重组穿梭质粒pDC315-Olig1-eGFP和重组腺病毒Ad5-Olig1-eGFP,测得重组腺病毒颗粒数为2.3×1011v.P./mL.结论:成功构建携带Olig1的重组腺病毒栽体Ad5-Olig1-eGFP,为缺血性脑血管病的基因治疗提供基因栽体并奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王得新	首都医科大学附属北京友谊医院神经内科	143	1082	18.0	25.0
2	张拥波	首都医科大学附属北京友谊医院神经内科	125	693	13.0	19.0
3	赵红	辽宁省大连市中心医院神经内科	7	10	2.0	3.0
4	王苏平	辽宁省大连市中心医院神经内科	25	32	4.0	5.0