BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

• 作者: 姜勇 孙学刚 张秀明 李树浓 李浩威 李红乐 邓宇斌 邢飞跃
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 干细胞 脑源性神经营养因子 腺病毒 绿色荧光蛋白 基因融合
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 438-442
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|R338.8
• 字数: 4509字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.04.002

摘要

目的:利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体(proBDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)高效表达.方法:采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-proBDNF和pAdTrack-BDNF, 采用化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-proBDNF和pAd-BDNF;转染293细胞,包装成重组病毒颗粒;将重组病毒上清感染rMSC,用荧光显微镜下观察和Western-blotting鉴定重组病毒在rMSC表达;用Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化; 用Ad -proBDNF和Ad-BDNF的感染的rMSC 接种于裸鼠肌肉内,两周后荧光显微镜下直接观察. 结果:成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能,体内移植实验表明Ad-proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC能在体内表达.结论:重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad-BDNF感染的rMSC 可以用于体内移植实验.