In-fusion技术构建表达、纯化钠泵α3亚单位膜外区截断性片段重组质粒

• 作者: 宋雅燔 张明娟 朱参战 杨军 段宗明 牛小麟 王蓉
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 钠泵α3亚单位 截断性片段 GST融合基因表达系统
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-207
• 页数: 5页
• 分类号: R318|R972.4
• 字数: 4175字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2009.02.005

摘要

目的 构建重组pGEX-6P-1原核表达载体,表达和纯化大鼠钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区的截断性片段. 方法 利用In-fusion技术将钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区基因片段插入线性化的pGEX-6P-1载体中,转化,提取质粒,PCR鉴定;用阳性重组质粒pGEX-Trf-α3转化大肠杆菌,IPTG诱导、表达融合蛋白GST-Trf-α3.采用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白, SDS-PAGE电泳分析表达产物的可溶性及含量.采用放射性配体结合法检测其生物活性.结果 PCR和基因测序分析显示大鼠钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区被成功插入pGEX-6P-1载体GST基因3′端,蛋白序列分析表明GST-Trf-α3融合蛋白总长度262个氨基酸,理论相对分子质量应约为33.22×103.IPTG诱导后,GST-Trf-α3融合蛋白的表达量为10%,多以可溶性形式存在,可溶性蛋白表达量为80.8%.SDS-PAGE结果 显示其纯度>95%.生物活性实验结果 显示GST-Trf-α3融合蛋白与3H-哇巴因具有一定的结合能力,但结合能力较弱.结论 采用In-fusion技术成功构建了表达GST-Trf-α3融合蛋白的原核表达载体,建立了纯化方法 ,获得高纯度的融合蛋白,为钠泵α3亚单位M1～M2和M3～M4膜外区功能以及其潜在的药理学作用研究获得了实验数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨军	西安交通大学医学院第二附属医院病理科	107	709	15.0	20.0
2	张明娟	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	49	240	7.0	13.0
3	牛小麟	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	85	262	8.0	11.0
4	朱参战	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	37	176	7.0	11.0
5	段宗明	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	32	151	6.0	11.0
6	王蓉	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	40	261	8.0	15.0
7	宋雅燔	西安交通大学医学院第二附属医院心内科	1	8	1.0	1.0