实验兔RAPD反应体系的优化及引物筛选

• 作者: 余佳 肖慧 蔡月琴 陈民利
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 实验兔 RAPD 体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: WHBE兔专栏
• 页码范围: 341-346
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 2401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2009.05.018

摘要

目的 建立实验兔随机扩增多态DNA(RAPD)的最优反应体系,并对RAPD引物进行筛选优化.方法 以白毛黑眼(WHBE)兔,日本大耳白(JW)兔,新西兰(NZW)兔为实验材料,对影响RAPD反应的各因素进行优化,摸索出最佳的Mg2+,dNTP,Taq酶,引物和DNA模板的浓度,并从60个随机引物中筛选出适合实验兔RAPD反应的引物.结果 最优RAPD-PCR反应体系为:在20 μl的反应体系中,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP 0.25 nmaol/L,Taq酶1.25 U,引物5 μmol/L,模板DNA 40 ng.60个RAPD引物中剔除了重复性差,条带模糊的引物后,有25个引物稳定,扩增出来的条带清晰、多态性高.结论 本研究筛选出的25个引物和建立的PCR体系可应用于实验兔的RAPD反应.