猪肺炎霉形体p52基因重组腺病毒的构建及其免疫特性

• 作者: 乔祖建 曹培丽 李媛 王亮 辛九庆 郭丹 陈超
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎霉形体 p52基因 重组腺病毒 免疫应答
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 712-717
• 页数: 6页
• 分类号: S852.62
• 字数: 4610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.08.011

摘要

为构建携带猪肺炎霉形体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)p52基因的重组腺病毒,从Mhp J株扩增p52基因,克隆到穿梭载体pShuttle-CMV中,经Pine Ⅰ线性化后,电转化入BJ5183菌内,与其含有的骨架载体pAdEasy-1同源重组,再与脂质体混合转染AD-293细胞,包装成完整的腺病毒,经RT-PCR、间接免疫荧光鉴定后扩增,收集病毒液,免疫BALB/c小鼠,并分析了体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫效果.结果表明,重组质粒pShuttle-CMV-P52插入片段为1 202 bp;同源重组成功;重组腺病毒可以正确表达目的蛋白,效价达1×106TCID50/mL.重组病毒经肌肉注射和滴鼻均可诱导小鼠产生血清和肺匀浆液特异性IgG、SIgA,但不能诱导特异的淋巴细胞增殖.证实,成功构建了表达p52基因的重组腺病毒,该病毒可诱发小鼠产生特异的体液免疫和黏膜免疫,但不产生细胞免疫应答.