荧光实时定量PCR检测尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-I基因方法的建立及初步应用

• 作者: 刘晓春 张勇 易诗白 李云 林浩然 马细兰 黄卫人
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 荧光实时定量PCR GH GHR IGF-I 发育性变化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 页码范围: 74-79
• 页数: 6页
• 分类号: Q7
• 字数: 5790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-6579.2009.03.016

摘要

为了准确分析尼罗罗非鱼生长激素(growth hormone , GH)、生长激素受体(growth hormone receptors, GHRs)和胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)在早期发育阶段的作用,实验设计了尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-I基因的特异性引物,提取垂体或肝脏总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了GH、GHR、IGF-I基因荧光实时定量PCR检测方法.运用建立的荧光实时定量 PCR检测了尼罗罗非鱼GH、GHR和IGF-I基因表达的发育性变化.结果表明在早期发育阶段,尼罗罗非鱼GH 与 IGF-I,GHR1与 GHR2的mRNA表达存在一定的互补关系;GH的表达与GHR1的表达呈显著正相关,提示GH与IGF-I,GHR1与GHR2在尼罗罗非鱼早期发育的不同阶段起主导作用,且GH可能主要通过与GHR1的结合起作用.