肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较

• 作者: 常宏 易濒 曹毅
• 来源期刊: 动物学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌组织及细胞系 总RNA抽提 反转录 q-RT-PCR 长片段基因克隆
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 520-526
• 页数: 7页
• 分类号: Q344:Q78|R735.7|Q813.1
• 字数: 6583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1141.2009.05520

摘要

该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法.比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响.新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高.RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要.部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常宏	中国科学院动物模型与人类疾病机理重点实验室	53	441	12.0	20.0
5	曹毅	中国科学院动物模型与人类疾病机理重点实验室	8	31	3.0	5.0
6	易濒	中国科学院动物模型与人类疾病机理重点实验室	1	8	1.0	1.0