Rspo1-EGFP重组腺相关病毒载体的构建

• 作者: 曹以诚 李新建 杜淑敏
• 来源期刊: 现代食品科技
• 学科: 工学
• 关键词: R-spondin1 增强型绿色荧光蛋白 腺相关病毒 流式细胞技术
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 993-997
• 页数: 5页
• 分类号: TS201.2
• 字数: 3231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-9078.2009.09.002

摘要

本文通过构建携带Rspo1-EGFP融合基因的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的重组腺相关病毒.首先利用PCR从cDNA文库中把Rspo1基因扩增出来,插入到pcDNA6-EGFP中EGFP的上游形成融合基因Rspo1-EGFP.采用AAV Helper-free包装系统,将融合基因用PCR方法从质粒pcDNA6-Rspo1-EGFP上扩增出来,亚克隆到AAV表达质粒pAAV-MCS多克隆位点中,构建出重组质粒pAAV-Rspo1-EGFP.重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-Rspo1-EGFP.重组病毒感染AAV-HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的目标基因表达,流式细胞技术测定病毒滴度.结果:酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-Rspo1-EGFP构建成功.病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒包装成功并介导融合基因在宿主细胞里表达,病毒滴度达107VP/mL.本研究成功包装出具有侵染性的重组朦相关病毒agV-Rspo1-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行Rspo1相关的体内体外研究提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹以诚	华南理工大学生物科学与工程学院	48	156	7.0	10.0
2	李新建	华南理工大学生物科学与工程学院	2	7	1.0	2.0
3	杜淑敏	华南理工大学生物科学与工程学院	2	0	0.0	0.0