抑制丙型肝炎病毒NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义

• 作者: 唐彤宇 姜艳芳 牛俊奇 王峰 苏秀芬
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 丙型肝炎病毒NS5A基因 短发夹RNA RNA干扰
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 技术交流
• 页码范围: 570-573
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建抑制丙型肝炎病毒NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统,观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用.方法:根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后线性的pSilencerTM 3.1-H1neo载体的H1启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒,进行电泳,将3个不同的RNAi质粒和阴性对照质粒分别与HCV NS5A真核表达质粒共转染正常肝细胞HL-7702细胞系,用Western blotting印迹法鉴定NS5A蛋白表达.结果:对重新构建的pSilencerTM 3.1-H1neoHCV NS5A-R1、R2、R3质粒进行测序,与设计的序列完全相同;3个质粒电泳均在4 348 bp处出现特异性条带;Western blotting印迹法测得R1、R2和R3的NS5A蛋白未见明显条带,阴性对照质粒NS5A蛋白在相对分子质量5 600处出现条带.结论:设计合成的3个不同位点的63个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全正确,对HCV NS5A基因表达有特异性抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛俊奇	吉林大学第一医院感染症科	189	1139	15.0	27.0
2	王峰	吉林大学第一医院感染症科	97	414	12.0	14.0
3	姜艳芳	吉林大学第一医院感染症科	59	187	6.0	10.0
4	唐彤宇	吉林大学第一医院感染症科	52	264	9.0	13.0
5	苏秀芬	吉林大学第一医院感染症科	9	29	3.0	5.0