籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建

• 作者: 严其煌 杨志坚 程祖锌 许明 郑祥正 郑金贵 黄志伟
• 来源期刊: 分子植物育种
• 学科: 农学
• 关键词: 籽粒苋 AmA1 基因克隆 原核表达 载体构建
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 新基因、新种质、新品种
• 页码范围: 793-800
• 页数: 8页
• 分类号: S6
• 字数: 4870字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/mpb.007.000793

摘要

本文采用RT-PCR方法,从籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)"千穗谷1号"的幼嫩种子克隆出AmA1基因的完整开放阅读框序列(ORF),其长度为915 bp,编码305个氨基酸.经Blast同源性分析,结果表明该序列与GenBank登录的籽粒苋AmA1基因的核苷酸序列基本一致,只在起始密码子下游51 bp处由G变成C,但不影响氨基酸的编码.将该基因插入原核表达载体pET28a(+),并转化到大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导,能正确表达出37 kD的融合蛋白.同时构建了AmA1基因双T-DNA双标记植物表达载体PCDMAR-AmA1-dsRed2-hpt,该载体含有2个独立的T-DNA区,其中一个T-DNA区含有选择标记基因hpt和可视标记基因DsRed2(红色荧光蛋白基因),另一个T-DNA区含有由水稻胚乳特异性表达启动子pGt1驱动的AmA1基因,在AmA1基因的两侧连有两段正向重复的烟草Rb7MARs,以增强AmA1基因的表达.实验结果为下一步规模化培育稻米氨基酸组成平衡无选择标记的转基因水稻奠定了基础.