黄鳍棘鲷重组IL-1β的表达及生物学活性检测

• 作者: 刘振兴 张殿昌 李建柱 江世贵
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 黄鳍棘鲷 rIL-1β Percoll不连续密度梯度离心 细胞培养 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 97-102
• 页数: 6页
• 分类号: Q344
• 字数: 5098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7075.2009.01.016

摘要

将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β(Interleukin 1β, IL-1β)基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达.采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性.经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β (Recombinant Interleukin 1β, rIL-1β).采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1.080 g/ml的界面上可以有效富集白细胞.用不同终浓度的rIL-1β和5μg/ml脂多糖(LPS)刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20 ng/ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5 μg/ml LPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张殿昌	中国水产科学研究院南海水产研究所	35	385	13.0	18.0
2	江世贵	中国水产科学研究院南海水产研究所	100	1501	22.0	31.0
3	李建柱	中国水产科学研究院南海水产研究所	6	53	3.0	6.0
4	刘振兴	中国水产科学研究院南海水产研究所	10	143	7.0	10.0