uPA和PAI-1基因克隆及真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张洁清 张纬 李力 覃捷 黎丹戎
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢上皮癌 UPA PAI-I 真核表达载体 构建
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-29
• 页数: 4页
• 分类号: R73-37|R737.31
• 字数: 2314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-930X.2009.01.010

摘要

目的:克隆人卵巢上皮癌组织uPA和PAI-1基因cDNA全长,构建表达uPA和PAI-1基因的真核表达载体.方法:采用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA和PAI-1基因的cDNA全长,克隆到pGEM-T Easy Vector上,通过酶切和测序进行鉴定;酶切后与真核表达载体pcDNA3.1/myc-his(-)B连接,酶切及测序再次鉴定;采用脂质体法将重组质粒DNA转染至卵巢癌上皮细胞SKOV3细胞;采用有限稀释法和G418分别加压筛选并培养SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞及对照细胞;Western blot 法检测转染前后SKOV3细胞uPA和PAI-1基因的表达.结果:成功扩增出uPA和PAI-1基因的cDNA的全长,并克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3.1-uPA和pcDNA3.1-PAI-1,Western blot 能检测到uPA和PAI-1基因蛋白分别在SKOV3-uPA和SKOV3-PAI-1细胞中的表达.结论:成功构建了uPA和PAI-1表达基因的真核表达载体,为进一步研究uPA和PAI-1基因在卵巢癌侵袭转移中的作用提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张洁清	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	88	432	12.0	17.0
2	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
3	黎丹戎	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	120	570	14.0	18.0
4	覃捷	广西壮族自治区人民医院妇产科	22	36	4.0	4.0
5	张纬	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	7	32	3.0	5.0