重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达

• 作者: 姚丽娟 孔建新 孙安源 张林杰 濮跃晨 罗以勤 赵亮
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子α 遗传载体 真核细胞 中国仓鼠卵巢细胞
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4104字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2009.01.001

摘要

目的 构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达.方法 以pGEM-T/sig-tumstatin为模板.扩增与TNF带重叠区的Ⅳ型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段.以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF.sig-TNF片段经酶切后,插人经同样酶切的pIRESneo3质粒.利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证.将重sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测.结果 所获得的sig-TNF片段(558 bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRESneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRESneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α.转染了pIRES-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别.结论 成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-á的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张林杰	安徽医科大学免疫学教研室	71	330	9.0	12.0
2	赵亮	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	20	62	5.0	6.0
3	罗以勤	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	27	130	7.0	10.0
4	孔建新	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	14	76	6.0	8.0
5	濮跃晨	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	10	36	3.0	6.0
6	姚丽娟	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	18	81	6.0	8.0
7	孙安源	安徽医科大学附属安徽省立医院检验科	6	39	3.0	6.0