重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体的构建及其表达

• 作者: 姚丽娟 孔建新 濮跃晨 罗以勤 聂江玲 董行 赵亮 马筱玲
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 遗传载体 真核细胞
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 342-347
• 页数: 6页
• 分类号: R73|R341|R392-33|R394.2
• 字数: 4171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2009.03.018

摘要

目的 构建重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达.方法 以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人tumstatin cDNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin.以pGEM-T/tumstatin为模板扩增含Ⅳ型胶原信号肽sig基因的sig-tumstatin基因片段,sig-tumstatin 片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tum-statin基因片段及重组载体进行验证.将重组sig-tumstatin 真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测.结果 所获得的sig-tumstatin片段(822 bp)序列与报道的序列完全一致.酶切鉴定的结果表明含重组人肿瘤抑素的pIRESneo3/sig-tumstatin表达载体构建成功.转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin的CHO-K1分泌表达了重组人tum-statin.另外,从生长曲线结果来看,转染了 pIRESneo3/sig-tumstatin真核表达载体和空载体的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢一些.结论 成功地构建了重组人tumstatin分泌型真核表达载体并获得能稳定表达tumstatin的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亮	安徽医科大学附属省立医院检验科	20	62	5.0	6.0
2	罗以勤	安徽医科大学附属省立医院检验科	27	130	7.0	10.0
3	孔建新	安徽医科大学附属省立医院检验科	14	76	6.0	8.0
4	聂江玲	安徽医科大学附属省立医院检验科	5	21	3.0	4.0
5	濮跃晨	安徽医科大学附属省立医院检验科	10	36	3.0	6.0
6	姚丽娟	安徽医科大学附属省立医院检验科	18	81	6.0	8.0
7	董行	安徽医科大学附属省立医院检验科	8	29	3.0	5.0