中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 曾养志 朱圣明 王宇 王竹 王艳萍 程惊秋 郑鸿 陆燕蓉
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 中国近交系版纳微型猪 α1,3-半乳糖基转移酶 异种移植
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 360-365
• 页数: 6页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文

摘要

克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line, BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galactosyltransferase α1,3-GT)并构建其真核表达载体.从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cDNA全长序列,克隆到pMD18-T载体,测序后再克隆到质粒pEGFP-N1中,构建α1,3-GT真核表达载体pEGFP-N1-GT.用脂质体法瞬时转染人肺腺癌细胞A549,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GT mRNA的表达;利用荧光素标记的植物凝集素(FITC-BS-IB4 lectin),直接免疫荧光法检测转染细胞中α1,3-GT合成α-Gal表位的能力.结果显示版纳微型猪α1,3-GT cDNA全长1 116 bp,其序列与GenBank中小鼠和牛α1,3-GT cDNA具有高度同源性,与猪α1,3-GTcDNA全长序列完全一致.酶切和PCR证实重组真核表达载体pEGFP-N1-GT构建成功.转染pEGFP-N1-GT的A549细胞有α1,3-GTmRNA表达,在其细胞膜检测到α-Gal表位的表达.中国近交系版纳微型猪α1,3-GT cDNA的克隆及其真核表达载体的构建为该基因在异种器官移植和肿瘤免疫治疗中的进一步研究和应用奠定了基础.