重组质粒pEGFP-C1-STAT6的构建及在HeLa细胞中表达

• 作者: 何津岩 方建飞 李晓冬 杨洁 葛林
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 增强型绿色荧光蛋白 STAT6 重组质粒
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2851字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2009.01.003

摘要

目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)为报告基因的重组质粒pEGFP-C1-STAT6,观察其在HeLa细胞中的表达.方法 以重组质粒pCLNEO-STAT6为模板,PCR法扩增出目的 基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP-C1上,构建重组质粒pEGFP-C1-STAT6,脂质体法转染HeLa细胞,Western 印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位和分布.结果 成功构建质粒pEGFP-C1-STAT6,并在HeLa细胞中实现表达;Western 印迹检测到融合蛋白EGFP-STAT6;在荧光显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位.结论 重组质粒pEGFP-C1-STAT6构建成功,可用于标记STAT6蛋白,为进一步研究STAT6在信号转导中的作用机制奠定基础.