犬TfR胞外区密码子的优化、真核表达及与犬细小病毒VP2蛋白结合

• 作者: 仲飞 李秀锦 潘素敏 王幸兴 王微 韩冬梅
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬转铁蛋白受体 密码子优化 真核表达 VP2蛋白
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1539-1543
• 页数: 5页
• 分类号: S858.292
• 语种: 中文

摘要

为制备大量具有天然活性的犬胞外区可溶性转铁蛋白受体(sTfR),本试验通过密码子优化提高sTfR在真核细胞中的表达水平.利用RT-PCR方法从犬肝脏中扩增sTfR编码基因,依据该基因编码的氨基酸序列,参照人偏爱的密码子,对该基因进行密码子优化并由公司合成.利用peDNA3.1-CD5质粒分别构建野生型和密码子优化的sTfR基因真核表达载体,经磷酸钙介导使其在HEK293T细胞中进行表达,利用Western-blotting鉴定表达产物,通过ELISA检测重组犬sTfR蛋白与犬细小病毒VP2蛋白的结合活性.结果显示本试验扩增的犬sTfR基因与GenBank该基因序列的同源性为100%;通过在HEK 293T细胞中进行瞬时表达,结果显示密码子优化可以明显提高sTfR基因在HEK 293T细胞中的表达水平,提高了75%.同时表达的sTfR蛋白能够与犬细小病毒VP2蛋白进行特异结合,表明表达的重组sTfR蛋白具有天然活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李秀锦	燕山大学环境与化学工程学院	20	122	7.0	10.0
2	仲飞	河北农业大学动物科技学院基础兽医系	21	74	5.0	7.0
3	王微	河北农业大学动物科技学院基础兽医系	10	53	5.0	7.0
4	韩冬梅	河北农业大学动物科技学院基础兽医系	9	53	5.0	7.0
5	潘素敏	河北农业大学动物科技学院基础兽医系	6	33	3.0	5.0
6	王幸兴	河北农业大学动物科技学院基础兽医系	4	31	3.0	4.0