靶向克隆法构建NY-ESO-1基因的原核表达载体

• 作者: 俞远东 徐少勇 王家宁 王斌 黄永章
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: NY-ESO-1 靶向克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法学研究
• 页码范围: 209-211,215,插2
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文

摘要

目的:利用PCR产物靶向克隆法构建人癌-睾丸抗原NY-ESO-1的原核表达载体.方法:从人新鲜的食管癌组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增NY-ESO-1基因3'端的340 bp片段,采用靶向克隆法将目的基因插入到原核表达载体pET-15b中,得到重组表达质粒pET-15b-NY-ESO-1,经过筛选,挑选出阳性克隆进行Xho Ⅰ和BamHⅠ双酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物核苷酸序列分析等,鉴定所构建的原核表达载体.结果:扩增得到NY-ESO-1基因片段,经测序证实与GenBank公布的序列一致,重组的质粒经过PCR,酶切鉴定获得了一个大小为340 bp的特征性片段,证明重组质粒中已成功的插入了目的基因NY-ESO-1.结论:靶向克隆法可快速、高效地构建人NY-ESO-1基因的原核表达载体,为制备pET-15b-NY-ESO-1融合蛋白奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐少勇	郧阳医学院附属人民医院肿瘤科消化内科	68	210	7.0	11.0
2	王家宁	郧阳医学院附属人民医院肿瘤科临床医学研究所	119	709	13.0	20.0
3	黄永章	郧阳医学院附属人民医院肿瘤科临床医学研究所	66	379	11.0	16.0
4	王斌	郧阳医学院附属人民医院肿瘤科消化内科	47	188	6.0	12.0
5	俞远东	郧阳医学院附属人民医院肿瘤科消化内科	7	4	1.0	2.0