筛选dbat启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建

• 作者: 付春华 余龙江 姚瑞枫 张蒙 张鹏 李书涛 陈丽
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 红豆杉细胞 dbat基因 酵母单杂交文库 结合蛋白 转录调控
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 117-120
• 页数: 4页
• 字数: 2620字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与dbat基因启动子顺式元件结合的转录因子.首先,分离dbat启动子上的顺式作用元件,并进行3个拷贝的重复后,和报告质粒pHis 2.1连接构建诱饵载体pHis 2.1-dp3.然后,从茉莉酸甲酯诱导的红豆杉细胞中提取总RNA,以纯化出的mRNA为模板,依次完成ss cDNA和ds cDNA的合成,并将纯化的ds cDNA、线性化载体pGADT7-Rec2和诱饵载体pHis 2.1-dp3共转化酵母细胞Y187,各取100 μl分别涂布于SD/-leu和SD/-leu/-trp平板,用于计算重组效率和转化效率,剩余转化液涂布于SD/-leu/-trp/-his/20 mM 3-AT平板,用于筛选阳性克隆.结果表明,重组效率为1.49×106 CFU/μg,共转化效率为1.93×105 CFU/μg;对阳性克隆质粒进行酶切、测序分析,得到6个可编码结合蛋白的基因.以上工作为筛选调控紫杉醇合成关键酶基因dbat表达的转录因子奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余龙江	华中科技大学生命科学与技术学院	263	4276	34.0	47.0
2	陈丽	华中科技大学生命科学与技术学院	84	596	12.0	22.0
3	张鹏	华中科技大学生命科学与技术学院	157	1071	19.0	26.0
4	李书涛	华中科技大学生命科学与技术学院	6	94	5.0	6.0
5	付春华	华中科技大学生命科学与技术学院	31	312	7.0	17.0
6	姚瑞枫	华中科技大学生命科学与技术学院	1	6	1.0	1.0
7	张蒙	华中科技大学生命科学与技术学院	2	6	1.0	2.0