人类乳头瘤病毒16 E7真核表达载体构建及对A431皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

• 作者: 何威 吴军 张斌 李颖 林自华 王儒鹏
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: HPV16 E7 A431皮肤鳞癌细胞 表达载体 增殖 侵袭 TGF-β
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 818-821
• 页数: 4页
• 分类号: R394-33|R730.23|R739.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2009.09.015

摘要

目的 构建HPV16 E7(E7)真核表达载体,观察E7过表达对A431细胞增殖和侵袭的影响.方法 从Casld细胞中抽提总RNA,针对E7序列设计特异引物,进行逆转录和聚合酶链式反应扩增得到E7 cDNA.应用基因工程方法将得到的PCR片段克隆至真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点.重组质粒经双酶切鉴定和测序后,使用LipofectamaineTM2000转染A431细胞.Western blot检测E7在细胞中的表达.WST-1和Transwell系统分别检测细胞增殖和侵袭能力.流式细胞术检测转染前后细胞周期的变化.ELISA检测TGF-β分泌情况.结果 经酶切、测序鉴定,E7基因正确插入到pEGFP-N1多克隆位点,获得pEGFP-E7;Western blot检测结果显示:与未转染组相比,转染组E7蛋白高表达.过表达E7的A431细胞增殖和侵袭能力均显著增强,细胞周期中S期细胞数量增多,G1期细胞数量相对减少.TGF-β分泌增多.结论 E7过表达可改变细胞周期,提高皮肤鳞癌细胞的增殖和侵袭能力,而分泌增多的TGF-β并不能抑制肿瘤的增殖和侵袭.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴军	第三军医大学新桥医院皮肤科	194	869	14.0	20.0
2	何威	第三军医大学新桥医院皮肤科	147	551	11.0	14.0
3	王儒鹏	第三军医大学新桥医院皮肤科	52	139	6.0	8.0
4	李颖	第三军医大学新桥医院皮肤科	54	335	10.0	15.0
5	林自华	第三军医大学新桥医院皮肤科	25	114	6.0	9.0
6	张斌	第三军医大学新桥医院皮肤科	24	85	5.0	7.0