TaqMan 实时荧光定量RT-PCR检测变异剪接体

• 作者: 李力 蒋胜
• 来源期刊: 肿瘤预防与治疗
• 学科: 医学
• 关键词: TaqMan探针 实时荧光定量RT-PCR ERCC1基因 变异剪接 卵巢癌
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 应用基础研究
• 页码范围: 1-4,后插1
• 页数: 5页
• 分类号: R730.2
• 字数: 4200字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0904.2009.01.001

摘要

目的:建立应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术对基因mRNA的各个变异剪接体分别进行定量检测的技术.方法:以对ERCCI的变异剪接体进行检测为例.使用TRIzol裂解新鲜手术切除的卵巢癌组织后提取总RNA,逆转录为eDNA后,PCR扩增ERCCI基因以及beta-actin基因,琼脂糖电泳分离PCR产物,纯化后连接到pMD18-T载体,转化人感受态大肠杆菌,提取并纯化质粒,稀释成不同浓度作为标准品以便制作标准曲线.结果:成功构建了缺失第Ⅷ外显子的ERCCI质粒以及beta-actin质粒,设计了两套针针对ERCCI的TaqMan探针和引物,建立了稳定的定量检测EBCCI mRNA变异剪接体表达水平的平台.结论:TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法可以成功地分别对基因的变异剪接定体进行定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	蒋胜	广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科	3	7	2.0	2.0