枯草芽孢杆菌B111中性蛋白酶基因BS2在毕赤酵母中的表达

• 作者: 张锐 白玮 郭三堆
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 枯草芽孢杆菌 中性蛋白酶 抗菌活性 毕赤酵母表达
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 876-883
• 页数: 8页
• 分类号: S4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.015

摘要

[目的]为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性.[方法]通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白.采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类.克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115.转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能. [结果]纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2.克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因BS2,并在毕赤酵母中获得有效表达.重组BS2蛋白分子量约69 kD,表达水平29.77 mg·L-1,水解酪素酶活力27800 U·g-1,并显示抗黄萎病菌活性. [结论]纯化鉴定了一个具有抗菌活性的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶BS2,克隆其编码基因BS2,并成功实现在酵母中的有效表达.