特异性抑制伪狂犬病毒EP0基因表达的siRNA分子的合成与筛选

• 作者: 习杨 周锐 方六荣 胡勤芹 郭洪 陈焕春
• 来源期刊: 畜牧市场
• 学科: 农学
• 关键词: siRNA 伪狂犬病毒 EP0
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 名家专栏
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 字数: 5303字
• 语种: 中文

摘要

EP0基因是伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的早期基因,可能与病毒复制及潜伏感染等有关.为了筛选特异性抑制EP0基因表达的siRNA序列,本研究按照Ambion公司公布的siRNA分子设计原则,设计并合成了3个针对PRVEa株EP0基因的siRNA模板EP04、EP08和EP12,分别克隆到以CMV启动子的siRNA表达载体pSilencer4.1-CMVneo中,构建相应的重组表达质粒p4.1-EP04、p4.1-EP08和p4.1-EP12.同时,将EP0基因的编码区克隆到真核表达载体pEGFP-N3中,按照读码框架与EGFP基因的5'端融合,获得重组表达质粒pEP0-EGFP.将p4.1-EP04、p4.1-EP08、p4.1-EP12和阴性对照质粒p4.1-NK分别与pEP0-EGFP共转染IBRS-2细胞,荧光显微镜观察、流式细胞仪和半定量RT-PCE检测结果表明,三个siRNA分子均能不同程度地抑制EP0基因的表达,抑制效率从高到低依次为EP08、EP12和EP04;在进一步的病毒感染实验中也得到了与细胞转染模型一致的结论.这为深入研究EP0基因在PRV复制和潜伏感染中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方六荣	华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室	75	818	15.0	24.0
2	周锐	华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室	23	337	10.0	18.0
3	习杨	华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
4	郭洪	华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
5	胡勤芹	华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室	5	14	3.0	3.0