Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立

• 作者: 刘苹 周元国 朱敏 李平 熊仁平 赵艳
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: c-ski 克隆 分子 序列分析 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1221-1224
• 页数: 4页
• 分类号: R349.8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.10.018

摘要

目的 测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立.方法 提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序.根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PCR引物,建立SYBR green定量PCR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-ski mRNA表达水平.结果 获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171).建立的SYBR green定量PCR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.991 49.体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样晶中c-ski mRNA水平为(1.024±0.18)×106拷贝/μl.结论 新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PCR的建立.