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摘要:
目的:克隆和测定Wistar大鼠smad3基因部分序列,构建检测Wistar大鼠smad3基因表达的重组质粒标准品并建立实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法.方法:提取并培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞的总RNA,逆转录(RT)-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18 T载体上,测序分析.用已测定序列的T载体作为标准品建立实时荧光定量PCR方法,并检测转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激对培养Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3 mRNA表达的影响.结果:测定Wistar大鼠smad3基因cDNA序列长415 bp,其与人、家鼠、小鼠具有较高的同源性,已被GenBank收录(DQ409172).建立的实时荧光定量PCR方法在103~107拷贝数/μl的标准品梯度稀释范围内相关系数为0.989 46.25 ng/ml TGF-β1刺激后Wistar大鼠皮肤成纤维细胞smad3基因表达升高为PBS刺激对照组的1.5倍.结论:获得Wistar大鼠smad3基因序列并成功建立了smad3实时荧光定量PCR的方法,为Smad3作用的分子机制研究提供了实验基础.
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文献信息
篇名 Wistar大鼠smad3 cDNA序列测定及其mRNA水平实时荧光定量PCR检测方法的建立
来源期刊 感染、炎症、修复 学科 医学
关键词 smad3 基因克隆 序列分析 定量聚合酶链式反应
年,卷(期) 2008,(2) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 82-86
页数 5页 分类号 R4
字数 3976字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1672-8521.2008.02.005
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研究主题发展历程
节点文献
smad3
基因克隆
序列分析
定量聚合酶链式反应
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
感染、炎症、修复
季刊
1672-8521
11-5225/R
16开
北京市海淀区阜成路51号
2000
chi
出版文献量(篇)
1943
总下载数(次)
2
总被引数(次)
4272
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
国家重点基础研究发展计划(973计划)
英文译名:National Basic Research Program of China
官方网址:http://www.973.gov.cn/
项目类型:
学科类型:农业
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