鸡γ-干扰素的可溶性表达及纯化产物的抗病毒活性

• 作者: 刘玉庆 孙守礼 张秀美 朱小玲 杜以军 胡北侠 齐静
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡γ-干扰素 原核表达 纯化 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 85-91
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2009.01.015

摘要

[目的]克隆鸡γ-干扰素(chIFN-γ)基因,大肠杆菌表达及产物纯化与活性检测.[方法]通过RT-PCR方法用ConA刺激的20日龄SPF鸡的脾脏淋巴细胞中扩增出chIFN-γ成熟蛋白基因cDNA,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a(+)-chIFN-γ,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blot鉴定.利用MDCK-VSV系统测定抗病毒活性.[结果]克隆得到456 bp的chIFN-γ成熟蛋白编码基因,大肠杆菌中成功表达chIFN-γ蛋白,分子量约为31.0 kDa,能与抗His的单克隆抗体和兔源多抗血清发生特异性反应.表达蛋白一部分形成包涵体,另一部分以可溶形式存在,可溶性蛋白经镍柱在天然条件下的纯化得率为3.0 mg/mL.生物学活性试验表明,1∶32稀释纯化的重组chIFN-γ(rchIFN-γ)孵育MDCK细胞后能抵抗100TCIDh50的VSV攻击.[结论]通过镍柱天然纯化获得的rchIFN-γ具有较好的抗病毒活性,为研制新型抗病毒干扰素制剂奠定基础.