用SELEX技术筛选葡萄球菌肠毒素B特异性适配体

• 作者: 兰小鹏 曾燕丽 江丽 甘龙杰
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 指数富集的配体进化技术 SEB 适体 磁珠
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 分子诊断研究进展
• 页码范围: 420-421
• 页数: 2页
• 分类号: R446.9
• 语种: 中文

摘要

目的 通过指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选能与葡萄球菌肠毒素B(SEB)特异、高素和力结合的单链DNA(ssDNA)适配体(aptamer).方法 体外构建一个长度为96个碱基的随机ssDNA文库,与靶物质SEB混合,以磁殊作为固相介质,利用热洗脱方法分离与靶标结合的核苷酸片段,通过PCR反复扩增、富集数个循环.利用荧光素标记适配体,测定筛选过程中各轮结合率;通过地高辛标记适配体,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体进行酶促显色反应,检测适配体的特异性.结果 经过13轮筛选,ssDNA文库与SEB的结合百分率从1.1%提高到39.8%.制备的适配体针对SEB的特异性强,与葡萄球菌A蛋白(SPA)及牛血清清蛋白(BSA)无非特异性结合.结论 成功利用SELEX技术筛选获得了特异结合SEB的高亲和力的ssDNA适配体,为金黄色葡萄球菌感染的诊断与治疗奠定了基础.