人Toll样受体2胞外区基因重组腺病毒的制备及鉴定

• 作者: 刘静 孙守勋 李强 蒲晓允
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Toll样受体2 腺病毒科 同源重组
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 医学检验
• 页码范围: 470-473
• 页数: 4页
• 分类号: R349.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.04.029

摘要

目的 构建含有人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因的重组腺病毒载体并进行鉴定.方法 应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增TLR2胞外区全长基因,克隆人pMD18-T载体并经测序验证后,通过KpnⅠ和HindⅢ双酶切将目的 片段定向克隆至经相同处理的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒中.将构建止确的重组质粒pAdTrack-CMV-TLR2用Pme Ⅰ酶切线性化后转化感受态AdEasier-1细菌,在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒.将鉴定正确的重组质粒pAd-TLR2经PacⅠ酶切线性化后,以脂质体法转染至293细胞中进行包装并扩增病毒.观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并测定病毒滴度,用PCR法鉴定重组腺病毒.结果 RT-PCR扩增得到的目的 基因片段与GenBank中的序列一致,经酶切鉴定及PCR检测证实携带人TLR2胞外区全长基因的重组腺病毒制备成功,获得高滴度(3×109pfu/ml)的重组腺病毒.结论 成功制备了表达人TLR2胞外区基因的重组腺病毒,为后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒲晓允	第三军医大学新桥医院检验科	128	531	11.0	16.0
2	李强	第三军医大学新桥医院检验科	76	457	13.0	17.0
3	刘静	第三军医大学新桥医院检验科	17	67	5.0	7.0
4	孙守勋	第三军医大学新桥医院检验科	7	47	4.0	6.0