一步法定点突变技术快速构建bsh基因突变启动子

• 作者: 冯莹颖 周青春 张强 张晓莉 秦龙娟 罗勤
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 一步法定点突变 单核细胞增生李斯特菌 bsh
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 28-32
• 页数: 5页
• 分类号: Q595
• 字数: 3817字
• 语种: 中文

摘要

目的:建立一种高效便捷的定点突变方法,为基因表达调控以及蛋白质结构和功能的研究提供技术支撑.方法:以构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)中编码胆碱水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的bsh基因突变启动子为例,采用一对完全互补并带有突变位点的引物扩增携带bsh基因启动子的重组质粒DNA全序列,通过Dpn Ⅰ消化PCR产物中剩余的甲基化的模板DNA,酶切后的PCR产物直接转化大肠杆菌,从而获得含有突变启动子的重组质粒.结果:通过一步法定点突变技术成功构建了bsh基因的三种突变启动子.结论:该方法简单高效,只要把握好对引物设计,高保真的DNA聚合酶、模板DNA的浓度以及PCR扩增程序的选择,突变成功率可以达到100%.