构建携带EGFP标志人白细胞介素10基因的重组腺病毒载体

• 作者: 张志坚 林健清 林献忠
• 来源期刊: 临床麻醉学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素10 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 58-60
• 页数: 3页
• 分类号: R6
• 字数: 2961字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带EGFP标志人白细胞介素10(hIL-10)基因腺病毒载体.方法 以pSNAV2.0-hIL-10重组质粒为模板.PCR扩增hIL-10基因,获得hIL-10 cDNA片段,并酶切连接到带有含强绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记的pDC316-IRES-EGFP-lacZalpha载体质粒上,Pmel线性化重组质粒pDC316-hIL-10-IRES-EGFP,与腺病毒包装系统AdMax转染293包装细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染293细胞扩增病毒后,进行离子交换法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、滴度.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组穿梭质粒pDC316-hIL-10-IRES-EGFP和重组腺病毒质粒Ad-hIL-10-IRES-EGFP.扩增纯化后.测得重组腺病毒颗粒数为3.2×1011VP/ml,OD260/OD280值约为2.0,滴度为1.1×1010TCID50/ml.结论 成功构建了重组腺病毒质粒Ad-hIL-10-IRES-EGFP,为进一步研究hIL-10基因奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林献忠	福建医科大学附属第一医院麻醉科	55	230	9.0	12.0
2	张志坚	福建医科大学附属第一医院神经内科	78	420	11.0	16.0
3	林健清	福建医科大学附属第一医院麻醉科	29	145	7.0	11.0