pEGFP-C1-miR-335重组质粒的构建及其在乳腺癌细胞中的表达

• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: miR-335 pEGFP-C1 微小RNA 乳腺癌细胞
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 肿瘤学研究
• 页码范围: 525-527
• 页数: 3页
• 分类号: R737.9
• 字数: 2097字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带融合型microRNA(微小RNA)基因miR-335的荧光真核表达质粒pEGFP-C1-miR-335,并观察其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达.为研究小RNA基因表达调控机制建立实验基础. 方法 应用基因重组技术,从人类基因组DNA中扩增miR-335的前体序列,经PCR引物加入酶切位点, 酶切后插入荧光真核表达载体pEGFP-C1, 构建miR9真核表达载体pEGFP-C1-miR-335, 然后进行酶切和测序鉴定重组质粒的正确性.应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入MDA-MB-231细胞,24 h后观察荧光蛋白表达情况,用Northern blot方法检测miR-335表达. 结果 酶切和测序鉴定证实插入miR-335前体片段序列正确.细胞转染24 h后,荧光显微镜下观察到GFP表达,60%左右转染细胞发出荧光.Northern blot检测到miR-335表达. 结论 成功构建pEGFP-C1-miR-335荧光真核表达载体,并可在乳腺癌细胞中有效表达.