多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157:H7

• 作者: 叶菊莲 张政 朱敏 程苏云 罗芸 金大智
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多重实时荧光定量PCR 肠出血性大肠杆菌O157:H7 检测
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 1135-1139
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 3734字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.12.023

摘要

目的 利用多重荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的定量方法.方法 选取肠出血性大肠杆菌O157:H7编码脂多糖基因(rfbE)和编码鞭毛抗原基因(fliC)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan-MGB探针,探针的5'端分别用FAM和HEX进行荧光标记,3'端标记MGB.优化PCR扩增体系,对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价,同时进行一定数量临床样本鉴定,与常规方法进行比较.结果 本研究所建立的多重实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测和鉴定肠出血性大肠杆菌O157:H7,能够有效甄别肠出血性大肠杆菌O157:H7与非H7菌株,其他菌株均无阳性结果;该方法的灵敏度可达到10 CFU/ml;定量检测的批间和批内变异系数均小于5%;对66例临床样本进行评价,结果显示15例肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性,2例为肠出血性大肠杆菌O157:非H7阳性,其中16例与常规培养法结果符合,符合率达到98.49%.结论 本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157:H7多重实时荧光定量PCR方法快速,结果准确、可靠,操作简便,为肠出血性大肠杆菌O157:H7的临床诊断、现场流行病学调查和食品安全监测提供了新的鉴定方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶菊莲		50	250	9.0	12.0
2	罗芸		56	262	10.0	12.0
3	朱敏		40	535	12.0	23.0
4	程苏云		72	743	14.0	24.0
5	张政		65	309	10.0	13.0
6	金大智		25	68	5.0	6.0