HCV核心抗原N-端片段生物素化表达质粒的构建及表达

• 作者: 买制刚 李凌云 林枫 陈少娟 雷明军 黄德兴
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 核心抗原 N-端片段 生物素化 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 949-952
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HCV核心(C)抗原N-端1～130 aa片段的生物素化表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达.方法 PCR扩增HCV C抗原N-端1～130 aa片段的编码基因,拼接上生物素-蛋白连接酶底物肽序列(BSP),构建重组原核表达质粒pGEX4T-1-CN130BSP,转化大肠杆菌Rosetta,IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE后,电转至硝酸纤维素膜上,以抗HCV C抗原的单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素对表达产物进行分析.结果 PCR扩增出约466 bp的目的 基因片段;质粒pGEX4T-1-CN130BSP经PCR及双酶切鉴定,与预期结果一致,测序鉴定基因无突变;SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为42 000,22℃诱导16 h可溶性表达产物含量较高;表达的重组蛋白可被抗HCV C抗原的单克隆抗体所识别,并能特异性结合辣根过氧化物酶标记的亲和素.结论 已成功构建了HCV C抗原N-端1～130 aa片段生物素化表达质粒,并表达出带生物素标签的GST融合蛋白,为进一步研制HCV双抗原夹心检测试剂奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	买制刚	深圳大学生化工程技术研究中心	12	68	4.0	8.0
2	李凌云	深圳大学生化工程技术研究中心	12	16	3.0	3.0
3	林枫	深圳大学生化工程技术研究中心	9	12	2.0	3.0
4	雷明军	深圳大学生化工程技术研究中心	6	8	2.0	2.0
5	陈少娟	深圳大学生化工程技术研究中心	4	8	2.0	2.0
6	黄德兴	深圳大学生化工程技术研究中心	1	3	1.0	1.0