人生物素基因的原核表达及纯化

• 作者: 吕同德 杨霄鹏 范兰芳 郭建巍
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物素 基因 融合表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 12-16
• 页数: 5页
• 分类号: Q784
• 字数: 4254字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2812.2007.03.004

摘要

目的 构建生物素原核表达载体,获取同源性、可溶性、高纯度的重组生物素融合蛋白,为生物素的深入研究及肿瘤的早期诊断奠定基础.方法 从胃癌细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增,克隆出生物素基因;用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ对生物素DNA和载体pET32进行双酶切,构建pET32-生物素重组质粒;将重组质粒转化BL21感受态细胞,通过氨苄青霉素抗性、PCR和重组质粒双酶切筛选重组子转化菌落,经DNA测序及BLAST比对,确认生物素基因序列正确性以及插入pET32质粒的位点和方向;用IPTG诱导表达,Western-Blotting鉴定,用Ni2+金属螯合层析柱纯化重组融合蛋白.结果 通过RT-PCR,经1%的琼脂糖凝胶电泳检测,扩增的生物素DNA片段与预期大小一致.经双酶切及DNA测序鉴定,生物素DNA定向插入了pET32质粒.用重组质粒转化大肠杆菌BL21、诱导表达和纯化目的蛋白.经Western-Blotting鉴定,所诱导的蛋白为重组生物素融合蛋白.结论 成功构建了生物素基因原核表达载体,表达和纯化了生物素融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭建巍	兰州军区兰州总医院临床实验科	22	128	5.0	10.0
2	吕同德	兰州军区兰州总医院临床实验科	83	291	8.0	13.0
3	杨霄鹏	兰州军区兰州总医院临床实验科	16	94	5.0	9.0
4	范兰芳	解放军第325医院门诊部	3	10	2.0	3.0