可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化

• 作者: 刘静 季明春 张伟 潘兴元 钱亚云 龚卫娟
• 来源期刊: 实用临床医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: H-2Kd H-2Kd-BSP融合蛋白 可生物素化序列
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R392.33
• 字数: 3588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.07.001

摘要

目的 构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体.方法 采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白.结果 成功构建 pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确.pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd -BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%, 主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上.纯化蛋白可被H-2Kd 分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别.结论 可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd -肽四聚体奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季明春	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	80	256	7.0	12.0
2	龚卫娟	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	81	302	10.0	13.0
3	刘静	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	29	145	7.0	11.0
4	潘兴元	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	18	48	4.0	6.0
5	张伟	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	36	123	6.0	9.0
6	钱亚云	扬州大学医学院病原生物学和免疫学教研室	39	83	5.0	7.0