可生物素化HLADRB1*07:01蛋白的原核表达和纯化

• 作者: 李敏英 李文 陶爱林
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: HLA-DRB1*07:01 重组表达 可生物素化 MHC四聚体
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1080-1084
• 页数: 5页
• 字数: 3824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2018.07.009

摘要

目的 诱导表达可生物素化的人类白细胞抗原HLA-DRB1*07:01蛋白,以制备MHC四聚体,为后续研究肽段与MHCⅡ的结合力、检测抗原特异性T细胞提供必要工具.方法 从GenBank中获得HLA-DRB1*07:01的cDNA序列,人工合成基因片段时,α链、β链的跨膜区加入亮氨酸拉链,其中β链还在跨膜区加入Avi标签.α链和β链分别与表达载体pET-44a和pETduet-1-Bira连接后转入大肠杆菌Rosetta构建原核表达体系,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白,并用免疫印迹法分析鉴定目的蛋白.结果 成功构建了重组质粒pET-44a-HLA-DRB1*07:01 α链和pETduet-1-HLA-DRB1 *07:01β链-BirA,0.25 mmol/L的IPTG可高效诱导目的蛋白表达,α链可被HLA-DRA抗体特异识别,目的蛋白可生物素化且可被链霉素特异识别.目的蛋白主要以包涵体形式表达,经反复洗涤可获得高纯度的蛋白.结论 成功构建了HLA-DRB1*07:01蛋白的原核表达系统,并得到纯化的可生物素化重组表达蛋白,为进一步制备HLA-肽四聚体奠定了实验基础.