胃黏膜特异表达JC病毒T抗原质粒构建及表达鉴定

• 作者: 关一夫 夏蒲 徐小燕 王薇 贾宝萍 郑华川 高野康雄
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: JC病毒 T抗原 真核表达 载体构建
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 18-21
• 页数: 4页
• 分类号: R731
• 字数: 2902字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCV T抗原表达质粒并进行鉴定.方法 利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的Nde Ⅰ位点,并在两端插入Bcl Ⅰ位点,通过BamH Ⅰ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCV T抗原质粒.利用酶切和DNA测序确认其DNA序列.免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCV T抗原质粒转染,用Western blot方法检测JCV T抗原的表达情况.结果 K19-JCV T抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCV T抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达.结论 同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑华川	中国医科大学基础医学院生物化学研究室	49	454	9.0	20.0
2	王薇	中国医科大学基础医学院病理生理学教研室	38	172	7.0	11.0
3	关一夫	中国医科大学基础医学院生物化学研究室	36	137	7.0	8.0
4	徐小燕	中国医科大学基础医学院病理生理学教研室	17	41	4.0	5.0
5	夏蒲	中国医科大学基础医学院生物化学研究室	5	20	3.0	4.0