大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株的构建及其免疫原性

• 作者: 李书光 沈志强 王金良 管宇 肖跃强
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 K99-ST1融合基因 融合蛋白 免疫原性
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 598-602
• 页数: 5页
• 分类号: S855.12|R535
• 字数: 3680字
• 语种: 中文

摘要

为了有效预防肠毒素性大肠杆菌引起的犊牛和羔羊腹泻,利用基因工程技术构建了融合基因K99-ST1及其原核表达载体,并时融合蛋白进行了初步免疫原性分析.结果显示,将PCR获得的K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段借助pUCm-T载体,成功构建重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得融合基因K99-ST1;使用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET30a中,成功构建表达载体pET-K99-ST1;将该表达载体转入表达菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到大小约31 000的蛋白;Western blotting显示,融合蛋白可以特异的与K99阳性血清反应;将BL21(DE3,pET-K99-ST1)诱导表达后免疫兔,ELISA检测K99抗体水平较高,乳鼠灌胃试验显示该菌株免疫后产生ST1抗体.这表明本试验已成功构建大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株BL21(DE3,pET-K99-ST1),该菌株具有良好的免疫原性,为大肠杆菌K99-ST1双价基因工程疫苗开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈志强		273	926	13.0	19.0
2	王金良		30	147	7.0	10.0
3	李书光		10	37	4.0	6.0
4	管宇		9	60	4.0	7.0
5	肖跃强		3	5	1.0	2.0