亚洲棉(Gossypium arboreum L.)全生育期均一化全长cDNA文库的构建和鉴定

• 作者: 刘传亮 张雪妍 李付广 王玉荣 陈亚娟
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 亚洲棉 全生育期 均一化 cDNA文库 EST
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1158-1164
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.005

摘要

[目的]构建二倍体亚洲棉石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库,建立亚洲棉功能基因组学研究基础平台,发掘亚洲棉发育、抗逆等相关基因.[方法]取石系亚1号子叶期、苗期、蕾期,花铃期不同组织器官,提取总RNA并分离纯化mRNA,采用SMART技术反转录全长双链cDNA.用DSN(duplex-specific nuclease)法对全长双链cDNA进行均一化,均一化的cDNA连接到入ZAPⅡ载体,包装蛋白包装后构建石系亚1号全生育期均一化全长cDNA文库.[结果]初级文库滴度4×106 pfu·ml-1,库容2×106 个独立克隆,重组率大于95%,插入片段平均长度大于1.5 kb.随机挑取192个克隆进行EST(expressed sequence tags)测序,冗余度仅为3.49%,BLASTN比对结果显示:78.31%的EST为新EST.[结论]文库均一化效果良好,质量符合要求,可能包含大量新基因,是进行EST测序、发掘新基因等棉花功能基因组学的研究平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李付广	中国农业科学院棉花研究所/农业部棉花遗传改良重点实验室	38	759	17.0	27.0