猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位区基因的克隆及原核表达

• 作者: 南文龙 周洁 彭大新 徐宝娟 李宇琴 罗飞 陆明哲 陈义平
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病毒 囊膜糖蛋白gB 主要抗原表位 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 27-28,36
• 页数: 3页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 2445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2009.12.013

摘要

参照GenBank发表的猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gB主要抗原表位的编码区基因序列,设计一对引物,通过PCR扩增后,将约为600bp的目的片段克隆到pGEM-T载体上,酶切后插入原核表达载体pET-32(a)的T7启动子下游,构建的重组质粒pET-gB经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达.SDS-PAGE结果显示,表达产物分子量约为42.4KDa,主要以包涵体形式存在.BandScan分析表明,表达量约占菌体蛋白的60.5%.利用His亲和层析方法得到了纯化的表达产物.Western blotting结果显示,重组蛋白能与阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原反应原性,可以作为检测用抗原.