DN-JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

• 作者: 全养雅 刘慧霞 张佳妮 谭莺 郭敏 陈金虎
• 来源期刊: 中国医师杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 原癌基因蛋白质c-jun 重组蛋白质类 腺病毒科
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 2907字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2009.01.009

摘要

目的 制备表达人c-jun氨基末端激酶(JNK)复制缺陷型重组腺病毒(Ad-DN-JNK).并通过动物实验进行功能鉴定.方法 将重组穿梭载体pAdTraek-CMV-DN-JNK线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体.将重组腺病毒栽体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定.Western blot检测Ad-DN-JNK在SD大鼠肝组织中JNK1蛋白表达情况,及胰岛素受体底物1丝氨酸307(IRS-1Ser307)磷酸化水平.结果 JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到了特定JNK基因片段并测序鉴定.所制备的Ad-DN-JNK滴度为2.5×1010pfu/ml,动物实验证实构建的Ad-DN-JNK能有效在肝组织表达.结论 该研究成功构建了DN-JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,动物实验证明Ad-DN-JNK能有效介导DN-JNK基因蛋白表达并下调IRS-1Ser307磷酸化水平.为进一步研究JNK的作用及应用DN-JNK进行相关疾病的基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘慧霞	中南大学湘雅医院老年病科	41	199	9.0	11.0
2	张佳妮	中南大学湘雅医院老年病科	12	68	6.0	7.0
3	郭敏	中南大学湘雅医院老年病科	9	19	2.0	3.0
4	谭莺	中南大学湘雅医院老年病科	6	41	3.0	6.0
5	陈金虎	中南大学湘雅医院老年病科	8	58	5.0	7.0
6	全养雅	中南大学湘雅医院老年病科	5	24	3.0	4.0