血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定

• 作者: 丁进亚 周虹 曹军皓 李津婴 许艳群 黄前川
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 铁效应元件 亚铁鳌合酶 短发夹RNA
• 年，卷（期）: 2009,（13）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-13
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2571字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2009.13.004

摘要

目的 利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-6-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定.方法 根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFF-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择最佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证最佳RNAi靶点的敲减效率.结果 经测序,模板序列与设计序列完全正确,最佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降.结论 成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周虹		52	314	8.0	15.0
2	曹军皓		40	200	7.0	12.0
3	丁进亚		43	237	8.0	13.0
4	黄前川		36	178	7.0	10.0
5	李津婴		24	75	5.0	6.0
6	许艳群		1	0	0.0	0.0