五节芒ISSR-PCR反应体系的优化

• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 五节芒 基因组DNA ISSR-PCR 优化
• 年，卷（期）: 2009,（29）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 14041-14043,14077
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 2773字
• 语种: 中文

摘要

[目的]保护五节芒的种质资源并为其开发利用奠定基础.[方法]以五节芒DNA为材料,分析DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响.并通过单因子试验对ISSR-PCR反应体系进行优化.[结果]建立了五节芒ISSR-PCR的最佳体系:25 μl反应体系中10×PCR Buffer 2.5 μl、0.2 mmol/L 4×dNTP、1.5 mmol/L Mg2+、0.75 U Taq DNA聚合酶.PCR反应程序为94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s;51～53 ℃退火30 s,72 ℃延伸50 s,40个循环;72 ℃再延伸7 min.利用优化反应体系从100个ISSR通用引物中筛选出了11个稳定性高、重复性好的引物.[结论]这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究五节芒遗传多样性奠定了基础.