棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及特征分析

• 作者: 倪志勇 吕萌 李波 王娟 白岩 范玲
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花 咖啡酸-O-甲基转移酶基因 基因克隆 表达分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1117-1126
• 页数: 10页
• 分类号: S5
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆棉花木质素合成关键酶基因GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3全长cDNA序列,分析其在不同组织部位的表达情况并进行原核表达研究.[方法]根据棉花纤维特异表达cDNA文库分析得到的EST序列设计引物,采用RT-PCR技术克隆基因,用生物信息学方法对获得的cDNA序列及推定的氨基酸序列进行分析.采用半定量RT-PCR方法研究GHCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3在不同组织中的表达.构建了基因的原核表达载体,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达.[结果]从发育的棉花纤维中克隆了3个COMT基因cDNAs,ChCOMT1(GenBank登录号为FJ479708)、GhCOMT2(GenBank登录号为FJ479709)和GhCOMT3(GenBank登录号为FJ848869)分别具有1 101 bp,1 098 bp、1 071 bp的开放阅读框,各自编码366、365和356个氨基酸.GhCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3在棉花各个组织中都有表达,GhCOMT1和GhCOMT2在根部的表达量最高,GhCOMT3在茎中表达量最高.SDS-PAGE电泳分析表明,3个蛋白的最佳诱导表达条件均为0.2 mmo1.L~(-1)IPTG在37℃下诱导6h.[结论]从棉花中克隆了3个木质素合成关键酶基因ChCOMT1、GhCOMT2和GhCOMT3,为进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	倪志勇	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	59	287	9.0	14.0
2	王娟	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	47	273	9.0	15.0
3	吕萌	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	15	210	8.0	14.0
4	范玲	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	43	483	12.0	20.0
5	李波	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	29	214	8.0	14.0
6	白岩	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	3	65	3.0	3.0