Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析

• 作者: 屈直 张添元 张爱联 潘英文 罗进贤
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: canstatin-N P.pastoris 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 25-28
• 分类号: Q786
• 字数: 2805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2010.03.025

摘要

目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白.方法:通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3'端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki.以含canstatin N 端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267 bp的canstatin的N 端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒 pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将 pPIC9Ki-CTN-N 转化 P.pastoris GS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115(pPIC9Ki-CTN-N).通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白.用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析.结果:在pAOX1的调控下,canstafin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用.结论:实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗进贤	中山大学生命科学学院	43	262	9.0	14.0
2	张添元	中山大学生命科学学院	28	203	7.0	13.0
3	潘英文	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	4	9	2.0	3.0
4	张爱联	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	15	39	4.0	5.0
5	屈直	中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室	19	50	5.0	6.0