非编码基因MALAT1功能性序列真核表达载体的构建及其在SW620细胞中的表达

• 作者: 徐川 李祖国 杨敏慧 王双双 王晓燕
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 非编码转录本 MALAT1 真核表达载体 人大肠癌SW620细胞 RT-touchdown PCR
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 248-252,257,封3
• 分类号: R735.34
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)功能性序列重组真核荧光表达载体,并在人大肠癌SW620细胞株中表达.方法 采用RT-touchdown PCR方法 ,从人正常大肠黏膜组织中提取总RNA,扩增MALAT1功能性序列,将扩增产物克隆至pTA2载体,测序证实后,克隆至pEGFP-C1质粒中,构建重组真核荧光表达载体;阳离子脂质体介导下转染人大肠癌SW620细胞,荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.通过Real-time PCR检测质粒转染前后MALAT1/fgf mRNA表达水平的变化.结果 经pTA2载体和pEGFP-C1载体克隆、酶切鉴定及序列分析后,证实人MALAT1功能性序列重组真核荧光表达载体构建成功.在荧光显微下观察到带绿色荧光的SW620细胞.pEGFP-C1-MALAT1/fgf转染前后SW620细胞MALATI/fgf mRNA表达水平倍比关系为2.376±0.573,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了人MALAT1功能性序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT1/fgf,转染SW620细胞后可引起MALAT1/fgf mRNA表达上调,为进一步研究MALAT1的结构、功能及其与人大肠癌的关联奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓燕	南方医科大学病理学系	25	284	8.0	16.0
2	李祖国	南方医科大学病理学系	29	324	11.0	17.0
3	杨敏慧	南方医科大学病理学系	8	63	4.0	7.0
4	王双双	南方医科大学法医学系	12	41	4.0	6.0
5	徐川	南方医科大学病理学系	2	15	2.0	2.0