小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreenl慢病毒载体的构建及神经干细胞转染

• 作者: 冯东福 毕永延 汪洋 潘栋超 陈二涛
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 Wnt3a 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1455-1459
• 分类号: R329
• 字数: 4278字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2010.12.002

摘要

目的 构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达.方法 利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreenl.构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Greenl慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照.免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达.结果 经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL.Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性.Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P＜0.01).结论 成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪洋	复旦大学上海医学院解剖与组织胚胎学系	118	753	14.0	20.0
2	冯东福	上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科创伤医学研究所	59	228	9.0	11.0
3	陈二涛	上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科创伤医学研究所	22	106	6.0	9.0
4	潘栋超	上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科创伤医学研究所	8	60	5.0	7.0
5	毕永延	上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科创伤医学研究所	6	22	3.0	4.0