Anti-LMP1scFv/tP融合蛋白基因递送载体在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 周克元 唐旭东 崔国辉 李祥勇 林观平 黄秀兰
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 潜伏膜蛋白1 单链抗体 鱼精蛋白截短体 融合蛋白 基因递送
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 377-386
• 页数: 10页
• 语种: 中文

摘要

潜伏膜蛋白1(LMP1)是一种EB病毒编码的膜蛋白,组成型表达于各种肿瘤细胞表面.通过体外基因拼装技术,构建抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因(anti-LMP1scFv/tP).在抗LMP1单链抗体基因的3'末端连接上编码鱼精蛋白截短体的基因序列,设计anti-LMP1scFv/tP融合蛋白基因.采用PCR为基础的基因拼接获得anti-LMP1scFv/tP.在大肠杆菌Rosseta中诱导表达anti-LMP1scFv/tP融合蛋白并利用其His标签在变性条件下通过Ni2+亲合层析介质进行纯化,纯化产物通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性.间接免疫荧光染色检测anti-LMP1scFv/tP融合蛋白的抗原结合活性,DNA凝胶迁移阻滞实验检测anti-LMP1scFv/tP的DNA结合活性,结果显示anti-LMP1scFv/tP融合蛋白能够与LMP1阳性表达的CNE1-GL细胞结合,而不能与LMP1阴性表达的CNE1细胞结合;同时复性anti-LMP1scFv/tP融合蛋白也具有与DNA结合的活性.本研究为该单链抗体用于靶向输送外源核苷酸的研究奠定了基础.