VEGF165基因表达载体的构建和鉴定

• 作者: 曹玉珏 李冬海 贺立新 马彩虹
• 来源期刊: 感染、炎症、修复
• 学科: 医学
• 关键词: VEGF165 转染 筛选 单克隆化 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 143-146
• 分类号: R3
• 字数: 3671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-8521.2010.03.008

摘要

目的:构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165并在哺乳动物细胞中实现目的基因的特异表达,为重组VEGF165进一步的生物学活性和临床研究奠定基础.方法:采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重组质粒转染小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,以抗生素培养基筛选抗性细胞,并对抗性细胞进行单克隆化,采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blotting等方法对目的蛋白在细胞中的特异表达进行分析鉴定.结果:完成真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165的构建,并成功转染NIH/3T3细胞,筛选到一批G418抗性的阳性细胞,单克隆化的阳性细胞(吸光度值0.345±0.064)与空载体转染(吸光度值0.114±0.012)的对照比较,有显著的VEGF165表达(P<0.01),SDS-PAGE和Western Blotting检测到VEGF165在扩大培养的克隆细胞中的特异表达.结论:应用pcDNA3.1(+)-VEGF165载体转染的NIH/3T3细胞可高效表达具生物学活性的VEGF165重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺立新	北京市右安门医院烧伤科	8	34	4.0	5.0
2	马彩虹	北京市右安门医院烧伤科	1	4	1.0	1.0
3	曹玉珏	北京市右安门医院烧伤科	4	24	3.0	4.0
4	李冬海	北京市右安门医院烧伤科	3	9	2.0	3.0